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免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染若轉(zhuǎn)染效率不高的改進(jìn)方式
發(fā)布時間： 2022-01-01 點(diǎn)擊次數(shù)： 1621次免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑是一種新開發(fā)的試劑，用于將DNA和siRNA轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中。Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑的尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10。本轉(zhuǎn)染試劑是通過細(xì)胞內(nèi)?和細(xì)胞主動吸收進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)入后對細(xì)胞膜無物理性損傷，不易出現(xiàn)細(xì)胞變形，保持高的細(xì)胞活力，不激活細(xì)胞表面或細(xì)胞體內(nèi)marker，可反映真實(shí)的細(xì)胞通路蛋白原始數(shù)據(jù)，可轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等。免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時應(yīng)使用優(yōu)質(zhì)質(zhì)粒：1.通過測量OD值來確定DNA純度和濃度，測得的OD值應(yīng)介于1.7-1.9之間。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。2.含有內(nèi)毒素的質(zhì)粒對細(xì)胞有很大的毒性作用。轉(zhuǎn)染時，小心輕柔的將lipo2000加到培養(yǎng)基中并輕輕混勻，避免粗暴用力吹打，會導(dǎo)致脂質(zhì)體失效。免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率不高，可以通過兩種方法改進(jìn)：1.復(fù)轉(zhuǎn)染，即轉(zhuǎn)染后12-24小時再次進(jìn)行轉(zhuǎn)染，前提是該細(xì)胞對脂質(zhì)體的耐受性較好，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡數(shù)較少。2.通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細(xì)胞。前提是該質(zhì)粒帶有抗生素抗性的基因。
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