Biozellen植物源基質(zhì)膠在內(nèi)皮細(xì)胞血管生成實(shí)驗(yàn)的操作應(yīng)用

內(nèi)皮細(xì)胞血管生成實(shí)驗(yàn)步驟

A、試驗(yàn)材料準(zhǔn)備:

1、內(nèi)皮細(xì)胞:臍帶內(nèi)皮細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)使用細(xì)胞代數(shù)需低于五代)

2、內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液(含內(nèi)皮生長(zhǎng)所需因子): 自己配置 or 采購(gòu)市售專用內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液 (如購(gòu)自Lonza或者Promocell等品牌)

3、生長(zhǎng)因子:VEGF,Heparin等(如購(gòu)自Sigma)

B、膠體制備試劑準(zhǔn)備:

1、A膠(1X)制備:將 A膠 (2X) 置于37℃水浴槽回溫10分鐘，確認(rèn)*溶解。A膠(2X)與含有生長(zhǎng)因子(例如VEGF等)的內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液，按照1:1比例混合均勻。(例如:將37℃水浴回溫的內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液取 0.5mL，直接加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A膠 (2X)，配置成 1 mL 的 A膠 (1X)。使用前置于37 ℃，可降低黏度。建議單次使用，勿重復(fù)冷凍解凍 A膠 (1X) )

2、A膠 (0.5X) 制備:將上述步驟1的 A膠 (1X)與含有生長(zhǎng)因子的內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液，按照1:1比例混合均勻。

3、C緩沖溶液 (5 X) 制備 : C緩沖溶液 (10 X) 與預(yù)冷的含有生長(zhǎng)因子的內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液，按照 1:1 比例混合均勻。(例如 : 0.5 mL C緩沖溶液 (10 X) + 0.5 mL 含有生長(zhǎng)因子的內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)液)

C、內(nèi)皮小管生成實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序:

1、將 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板放置于冰上。

2、加入 50 μl A膠 (0.5X) 平鋪到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)。

3、將步驟 2 的培養(yǎng)板置于冰上 10 分鐘。

4、加入 100 μl 冰的C緩沖溶液(5 X)，蓋過(guò)步驟3的A膠，在冰上反應(yīng)15分鐘.(C緩沖溶液用于A膠凝膠反應(yīng))

5、待反應(yīng)15分鐘后，小心的吸出 C 緩沖溶液。

6、加入100μl含有生長(zhǎng)因子5 μg/ml VEGF及0.25 mM Heparin之內(nèi)皮細(xì)胞懸浮液，使每孔細(xì)胞數(shù)目為2.5x10^4 cells/well (細(xì)胞濃度為2.5 x 105 cells/mL)。

6.1、(注):建議添加VEGF及Heparin方式如下，取1 mL細(xì)胞濃度2.5 x 105 cells/mL的內(nèi)皮細(xì)胞懸浮液進(jìn)行離心，并收集細(xì)胞沉淀。 細(xì)胞沉淀物先與0.125 mL的40 μg/ml VEGF及0.125 mL，2 mM Heparin 進(jìn)行混合5-10分鐘。最后再加入0.75 mL細(xì)胞培養(yǎng)液，使VEGF最終濃度為5 μg/ml、Heparin最終濃度為0.25 mM及細(xì)胞濃度為2.5 x 105 cells/mL。

7、將細(xì)胞培養(yǎng)板在37 ℃, 5 % CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)12小時(shí)內(nèi)完成。(建議內(nèi)皮細(xì)胞觀察時(shí)間為6-8小時(shí))

在內(nèi)皮細(xì)胞血管生成實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用編輯

在內(nèi)皮細(xì)胞血管生成實(shí)驗(yàn)中所用到的基質(zhì)膠產(chǎn)品信息：

美國(guó)Biozellen植物源基質(zhì)膠（貨號(hào)B-P-00002系列）編輯

產(chǎn)品描述 ：Biozellen®3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝包含整套基質(zhì)膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應(yīng)用到 3D 細(xì)胞培養(yǎng)與微環(huán)境應(yīng)用等；本試劑盒操作便利且可調(diào)控基質(zhì)膠硬度進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試等；膠體可快速被固定液分解。（Biozellen®3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝為植物來(lái)源，無(wú)動(dòng)物源成分、不含酚紅）

貨號(hào)： B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

規(guī)格： 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

保存條件：4℃保存、 保存兩年

安培生物科技有限公司是美國(guó)Biozellen公司的中國(guó)代理商。Biozellen®3D細(xì)胞/類器官培養(yǎng)基質(zhì)膠現(xiàn)貨供應(yīng)，經(jīng)驗(yàn)證可*替代BD/康寧的基質(zhì)膠，來(lái)源為植物源且氨基酸序列人源化，無(wú)人畜共患病的病原菌或毒素污染，提供完整售后服務(wù)和技術(shù)支持。

安培生物科技有限公司（Biozellen中國(guó)代理商）

致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步和值得信賴的合作者